影響熒光定量 PCR 儀的檢測靈敏度的因素有哪些？

一、引物和探針設(shè)計

特異性：設(shè)計的引物和探針應(yīng)具有高度特異性，能準確識別目標序列。如果引物和探針與非目標序列發(fā)生結(jié)合，會產(chǎn)生非特異性擴增，降低檢測的靈敏度。例如，在檢測呼吸道合胞病毒的研究中，根據(jù)復(fù)合探針技術(shù)原理，以其 F 蛋白基因作為基因靶序列建立檢測方法，對引物與探針進行優(yōu)化與篩選，提高了檢測的靈敏度。

結(jié)合效率：引物和探針與目標序列的結(jié)合效率也會影響靈敏度。結(jié)合效率高，能夠更有效地啟動 PCR 反應(yīng)，從而提高檢測靈敏度。

二、反應(yīng)體系

酶的活性：PCR 反應(yīng)中使用的聚合酶活性對靈敏度有重要影響。高活性的聚合酶能夠更高效地催化 DNA 合成，提高擴增效率，進而提高檢測靈敏度。

dNTP 濃度：合適的 dNTP（脫氧核糖核苷三磷酸）濃度是保證 PCR 反應(yīng)正常進行的關(guān)鍵之一。濃度過高可能導(dǎo)致非特異性擴增增加，濃度過低則會影響擴增效率，降低檢測靈敏度。

鎂離子濃度：鎂離子在 PCR 反應(yīng)中起到重要作用，它能影響聚合酶的活性和穩(wěn)定性。合適的鎂離子濃度可以提高聚合酶的活性，從而提高檢測靈敏度。但鎂離子濃度過高或過低都會影響 PCR 反應(yīng)的效率和特異性。

三、儀器性能

熒光檢測系統(tǒng)：熒光定量 PCR 儀的熒光檢測系統(tǒng)的性能直接影響檢測靈敏度。高靈敏度的熒光檢測系統(tǒng)能夠更準確地檢測到微弱的熒光信號，從而提高檢測靈敏度。例如，朗基實時熒光定量 PCR 儀（如 Q2000B、Q1000+）在熒光檢測靈敏度、溫度控制精度、操作便捷性等方面優(yōu)于 ABI 7500，尤其適合對成本敏感、需高通量或低拷貝檢測的實驗室。

溫度控制精度：精確的溫度控制對于 PCR 反應(yīng)的穩(wěn)定性和重復(fù)性較為重要。溫度控制精度高的儀器能夠更好地保證 PCR 反應(yīng)的特異性和效率，從而提高檢測靈敏度。

Q2000熒光定量PCR儀采用半導(dǎo)體芯片技術(shù)：升溫速率高達 6-7℃/ 秒，控溫精度≤±0.1℃，溫度均勻性更好。

雙通道同步檢測：減少延時誤差，縮短實驗時間。

多通道擴展：支持至多 21 個通道。

單機運行與斷電保護：支持觸控屏操作，實驗數(shù)據(jù)安全。

四、樣本質(zhì)量

核酸提取方法：高效的核酸提取方法能夠獲得高質(zhì)量的核酸樣本，減少雜質(zhì)的干擾，提高檢測靈敏度。如果核酸提取過程中存在雜質(zhì)，可能會抑制 PCR 反應(yīng)，降低檢測靈敏度。

樣本中的抑制物：樣本中可能存在的抑制物，如血液中的血紅蛋白、土壤中的腐殖質(zhì)等，會抑制 PCR 反應(yīng)，降低檢測靈敏度。在檢測不同類型的樣本時，需要考慮樣本中可能存在的抑制物，并采取相應(yīng)的措施去除或減少抑制物的影響。

所以，熒光定量 PCR 儀的檢測靈敏度受引物和探針設(shè)計、反應(yīng)體系、儀器性能和樣本質(zhì)量等多種因素影響。在實際應(yīng)用中，需要綜合考慮這些因素，優(yōu)化實驗條件，以提高檢測靈敏度。

蘇州阿爾法生物提供實驗室儀器設(shè)備主要有PCR儀、實時熒光定量PCR儀等。

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