細胞培養(yǎng)是指使真核或原核細胞在生理條件下生長的實驗室方法。它的起源可以追溯到 20 世紀初，當時它被引入研究組織生長和成熟、病毒生物學和疫苗開發(fā)、基因在疾病和健康中的作用，以及使用大規(guī)模雜交細胞系生產(chǎn)生物制藥。建立細胞培養(yǎng)實驗室應具備的條件有哪些？

細胞培養(yǎng)實驗室

細胞培養(yǎng)實驗室安全

   細胞培養(yǎng)過程中需要管理與培養(yǎng)細胞攜帶的感染因子（例如 HBV 或 HIV）相關(guān)的潛在危害，還需要控制可能具有毒性、腐蝕性或致突變性的試劑。這些潛在危害進入人體后（例如，通過皮膚和粘膜與固體、液體或氣溶膠接觸）會危及實驗室工作人員的健康，并在處理不當時威脅環(huán)境。

實驗室安全

細胞實驗室安全主要包括：

● 每個實驗室工作人員都應對自己的健康和安全以及可能受到細胞培養(yǎng)實驗室工作影響的其他人的健康和安全負責。

● 進入細胞培養(yǎng)實驗室時必須穿戴個人防護設(shè)備，離開或污染任何個人防護設(shè)備時必須脫掉。在處理危險劑時，必須立即取下可能受污染的手套并將其丟棄在生物危害廢物中。洗手。

●不建議穿著露趾鞋、短褲和裙子暴露皮膚。

●細胞培養(yǎng)實驗室內(nèi)不允許食用食物、飲料、儲存雜貨、吸煙、使用化妝品或處理隱形眼鏡。

●在細胞培養(yǎng)實驗室工作時不應使用手機。

●開始工作前應脫掉寬松的衣服（例如圍巾、懸垂的項鏈），并將頭發(fā)系在腦后。

●細胞培養(yǎng)實驗室必須保持整潔并定期用消毒劑清潔（例如培養(yǎng)箱、層流罩和工作臺面）。

●所有與潛在傳染性或危險物質(zhì)接觸的實驗室工具在使用前后都必須進行凈化處理。具有潛在感染性和危險性的材料必須通過他們推薦的路線進行凈化和處置。

●尖銳物品（例如移液器吸頭）必須立即通過指定的尖銳物品箱進行處理。

●離開細胞培養(yǎng)實驗室前應洗手。

●在接觸或溢出傳染性或危險物質(zhì)時，應通知實驗室的安全官員，以就適當?shù)亩糁坪蛢艋呗蕴岢鼋ㄗh。

細胞系的安全處理

  危險病原體咨詢委員會 (ACDP) 是由健康與安全執(zhí)行官 (HSE) 管理的國家機構(gòu)。它就接觸病原體對工人和其他人造成的危害和風險提出建議，并發(fā)布了這些建議。由于某些細胞類型具有致病性或攜帶致病因子，因此確定細胞系的危險系數(shù)并實施適當?shù)陌踩胧┓浅Ｖ匾＜毎档陌踩幚碇饕〞骘L險評估和實驗室設(shè)施審查。

   分類為危險組 1 的微生物（例如，大腸桿菌K-12）或 2（例如，金黃色葡萄球菌）代表對實驗室工作人員和社區(qū)的低度或中度健康風險，并且依賴于有效的預防或治療方案。使用危險組 3 的生物制劑進行細胞培養(yǎng)（例如，嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥相關(guān)冠狀病毒（SARS-CoV））和 4（例如，埃博拉病毒）涉及具有高健康風險的生物制劑，并且在感染后可能缺乏治療選擇。

因此，實驗室空間需要提供與培養(yǎng)細胞類型的危險組相對應的防護等級。 

細胞培養(yǎng)實驗室的安全要求

   為了確保使用細胞系和生物危害劑的安全工作環(huán)境，必須在細胞培養(yǎng)實驗室中佩戴個人防護設(shè)備 (PPE)。實驗室工作服、手套和護目鏡在實驗室工作人員和潛在危險源之間形成一道屏障。此外，生物安全柜依靠 HEPA 過濾空氣的穩(wěn)定、單向流動，創(chuàng)造一個封閉、通風的工作空間。這較大程度地減少了研究人員和環(huán)境對與培養(yǎng)細胞相關(guān)的有害物質(zhì)的暴露，同時保護細胞培養(yǎng)物免受污染。在細胞培養(yǎng)實驗室處理細胞培養(yǎng)基和進行實驗時，還建議查看與實驗室試劑相關(guān)的材料安全數(shù)據(jù)表 (MSDS)。

細胞培養(yǎng)方法

盡管在不同的細胞培養(yǎng)實驗室中采用了各種技術(shù)和檢測方法，但細胞培養(yǎng)工作的共同主題是無菌——創(chuàng)造一個沒有不需要的病原微生物（包括細菌、病毒、真菌和寄生蟲）的微環(huán)境。由于無菌是成功的細胞培養(yǎng)工作的重要組成部分，因此需要建立單獨的細胞房或指定區(qū)域，不得用于其他目的。

細胞房常用的實驗室設(shè)備如下：

生物安全柜：創(chuàng)造無菌工作臺面；II類和III類推薦

CO 2培養(yǎng)箱：為細胞生長提供生理環(huán)境

倒置光學顯微鏡：評估細胞形態(tài)和計數(shù)細胞

冰箱、冰柜（-20°C、-80°C）：儲存細胞、細胞材料和培養(yǎng)成分

離心機：細胞分離、濃縮細胞

酸度計：確定培養(yǎng)基成分的正確 pH 值

移液器和移液吸頭：分裝不同體積的細胞，分裝試劑

細胞培養(yǎng)基和輔助成分：培養(yǎng)細胞（養(yǎng)分來源）

細胞計數(shù)儀：對細胞進行計數(shù)，確定生長動力學并準備合適的接種密度

高壓滅菌器：對與細胞接觸的移液器和其他設(shè)備進行消毒

真空泵：吸出細胞培養(yǎng)基

水浴鍋（可調(diào)溫）：預熱細胞培養(yǎng)基，解凍細胞

細胞培養(yǎng)皿、細胞培養(yǎng)瓶：以不同形式培養(yǎng)細胞（例如，燒瓶、培養(yǎng)皿、96 孔板）

三角搖瓶、生物反應器：適用于大規(guī)模細胞培養(yǎng)

廢物容器（生物危害）：垃圾分類處理

其他設(shè)備：包括 流式細胞儀、細胞分選儀、活細胞成像分析儀等。#細胞培養(yǎng)瓶#

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